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尼氏染色的具體操作步驟及注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2022-09-08 00:00:00       點(diǎn)擊次數(shù):9453

  關(guān)于尼氏染色,你的了解有多少呢?來跟小編一起看看吧!
  尼氏體(Nisslbody)或稱尼氏小體,分布于神經(jīng)細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的三角形或橢圓形小塊狀物質(zhì)。尼氏染色(FrannaNissl(1860-1919))1892年創(chuàng)立了Nissl染色法,以發(fā)現(xiàn)Nissl小體和Nissl變性而聞名。常用的堿性染料有Cresylviolet(焦油紫,甲酚紫,克紫);thionine(硫荲);tolridineblue(甲苯胺藍(lán))等。
  尼氏染色原理
  神經(jīng)元細(xì)胞體包括一個(gè)具有皺褶核膜的大細(xì)胞核、稀疏的染色質(zhì)和一個(gè)明顯的核仁。在細(xì)胞體中細(xì)胞質(zhì)是尼氏顆粒,即能夠代表粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)并在很多神經(jīng)元中產(chǎn)生特異的斑點(diǎn)狀嗜堿性表現(xiàn)的嗜堿性顆粒。尼氏顆粒可以用很多染色來顯示如中性紅、亞甲基藍(lán)、甲苯胺藍(lán)和甲基紫等。染色的變異、pH和分化的時(shí)間使一些染色既可以僅突出尼氏物質(zhì),也可以顯示神經(jīng)元的細(xì)胞核和神經(jīng)膠質(zhì)。各種神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)都含有尼氏體,但其形狀、數(shù)量、分布位置常常不同。尼氏體也存在于樹突中,但不在于軸突和包體的軸丘。尼氏體會(huì)因?yàn)樯頎顟B(tài)的變化而變化,尼氏體是神經(jīng)元內(nèi)合成蛋白質(zhì)合成的重要部位,當(dāng)神經(jīng)元受到刺激后,包體內(nèi)的尼氏體會(huì)明顯減少。通常尼氏能被堿性染料如硫堇、亞甲藍(lán)、甲苯胺藍(lán)和焦油紫等染料染成紫藍(lán)色。
  尼氏染色操作步驟(僅供參考):
  1.固定:可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福爾馬林溶液。
  2.組織切片
  3.切片脫蠟入水。
  4.用甲基紫染色液涂片,染色10~20min。
  5.蒸餾水沖洗。
  6.用NisslDifferentiation分化4~8s,直到大部分染色被消除。
  7.直接經(jīng)無水乙醇至二甲苯,顯微鏡下觀察。
  8.如果有必要,重復(fù)步驟6和7。重復(fù)時(shí),給予少量NissolDifferentiation分化。
  9.在二甲苯中充分沖洗。加拿大香脂或DPX封片。
  尼氏染色結(jié)果:
  尼氏物質(zhì)或尼氏小體紫黑藍(lán)色;
  神經(jīng)元;淡紫藍(lán)色;
  細(xì)胞核紫藍(lán)色;
  尼氏染色注意事項(xiàng):
  1.尼氏體離體后容易溶解,所以組織取出后應(yīng)立即固定,否則難以著色。
  2.組織固定起著非常重要的作用,固定可采用乙醇、Carnoy固定液或中性福爾馬林溶液。
  3.本染色液對(duì)石蠟組織切片的尼氏染色效果較好。
  4.如果要證實(shí)尼氏物質(zhì)的存在,那么染色后必須要用NissolDifferentiation分化。
  5.石蠟切片厚度7~10μm或25μm(皮質(zhì)神經(jīng)元密度的評(píng)估要用25μm厚的切片)。
  6.染色后的標(biāo)本務(wù)必避光保存,否則容易褪色。
  7.主要由甲基紫染色液、分化液等組成。尼氏物質(zhì)呈紫黑藍(lán)色,神經(jīng)元呈淡紫藍(lán)色,細(xì)胞核呈紫藍(lán)色。
  以上就是尼氏染色的相關(guān)介紹,你了解了嗎?

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