細(xì)胞ROS檢測具體是怎樣進(jìn)行檢測的,小編來帶大家了解一下吧!
活性氧檢測試劑盒是利用熒光探針DCFH-DA進(jìn)行活性氧檢測的。DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細(xì)胞膜,進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)后,可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細(xì)胞膜,從而使探針很容易被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的活性氧可以氧化無熒光的DCFH生成有熒光的DCF。檢測DCF的熒光就可以知道細(xì)胞內(nèi)活性氧的水平?;钚匝鯔z測試劑盒。
熒光法檢測線粒體產(chǎn)生和釋放的反應(yīng)性氧化物(ROS)[10]。羥基自由基的檢測(二羥芐胺DHBAs和水楊酸鹽Salicylate)[11]ROSwasevaluatedbythestainingof2’,7’-dichlorofluoresceindiacetate(二氯熒光乙酰乙酸鹽).ROSproductionwasdetectedbynitrobluetetrazolium(NBT,硝基四氮唑藍(lán))assay。
目前,對(duì)于細(xì)胞線粒體產(chǎn)生的ROS測定,所發(fā)展的方法有(熒光標(biāo)記后)激光掃描共聚焦顯微術(shù)(Takahashietal.,2002)和熒光探劑DCFDA標(biāo)記后的熒光分光光度法(Esposti,2002)等,本實(shí)驗(yàn)以lucigenin或luminol為探劑,用化學(xué)發(fā)光技術(shù),對(duì)從正常大鼠肝細(xì)胞及心肌細(xì)胞分離的線粒體的METC電子漏進(jìn)行了測定
以上就是細(xì)胞ROS檢測的具體方法,大家都了解了嗎?
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